| 형광 측정약물 처리 직후, 시료를 2% 포름알데히드(#F1635; Sigma-Aldrich)를 함유한 PBS 용액에 10분간 고정시켰습니다. 그런 다음 시료를 PBS로 세 번 세척하고, 이어서 0.1% Triton X-100(#X100; Sigma-Aldrich)을 함유한 PBS 용액에 10분간 투과처리했습니다. 시료를 PBS로 다시 세 번 세척한 후, PBS에 1:2,000의 부피비로 희석한 팔로이딘 iFluor 488(#ab176753; Abcam, Cambridge, UK) 용액으로 상온의 암습실에서 20분간 염색했습니다. 시료를 PBS로 세 번 세척한 후, 100배 유침 대물렌즈를 사용하여 광시야 및 에피형광 모드에서 역광학 현미경(Ti-E; Nikon, Tokyo, Japan)으로 이미지를 촬영했습니다.림 비율 결정혈소판 윤곽을 결정하기 위해, 이전에 설명된 합성곱 신경망을 사용하여 위상차 이미지에서 이진 마스크를 얻었습니다.35 F- 액틴 테두리 비율은 혈소판 테두리 영역의 F-액틴 형광 강도의 산술 평균을 혈소판 중심 영역의 F-액틴 형광 강도의 산술 평균으로 나눈 값으로 정의했습니다. 테두리와 중심 영역을 정의하기 위해, 먼저 혈소판의 면적 A (이진 마스크에서 결정됨) 로부터 혈소판의 유효 반경 reff를 계산 했습니다 . |