| 우리는 더 높은 산화환원 전위를 가진 APEX2의 4중 돌연변이체인 APOX를 개발함으로써 이러한 한계를 극복했습니다. 우리는 높은 산화환원 전위를 가진 NP 프로브를 사용한 초고속 처리량 유도 진화의 두 차례 연속적인 과정을 통해 APOX를 개발했으며, 이를 통해 효소 구조 전체에 걸쳐 유익한 돌연변이를 식별할 수 있었습니다. APOX의 세 가지 돌연변이(F41V, Y235F 및 H239Y)는 헴 보조인자 근처에 위치하지만 기질 결합 부위와는 멀리 떨어져 있으며, 이들은 종합적으로 효소 환원 전위를 증가시킵니다( 그림 3F ~3H). 네 번째 돌연변이인 S69I는 효소 환원 전위에 영향을 미치지 않으며( 그림 S73 ), 페놀성 기질 인식을 향상시킵니다( 그림 S62 및 주석 S2 ). 65 , 66APOX의 향상된 활성 덕분에 높은 산화환원 전위를 갖는 페놀 프로브를 사용하여 공간적으로 분해능이 있는 단백질체 매핑을 수행할 수 있었습니다. 이전 연구에서 테스트되었던 비오틴 니트로페놀(BNP) 프로브( 7 , 12) 는 살아있는 포유류 세포막을 투과하지 못한다는 것을 확인했습니다. 우리는 막 투과성 NP-A 프로브와 APOX를 함께 사용하여 성공적으로 PL을 수행했습니다. 중요한 것은 APOX가 포유류 세포의 여러 구획에서 우수한 발현과 높은 활성을 나타낸다는 점입니다. APOX의 환원 전위가 APEX2에 비해 증가했음에도 불구하고 발현이나 촉매 활성이 저해되지 않는다는 것은, 발현이 잘 되고 회전율이 높은 효소를 선택하는 활성 기반 초고속 처리량 진화의 이점을 보여줍니다.실시간스포츠중계먹튀갤블랙티비블랙티비블랙티비블랙티비블랙티비고화질 스포츠중계실시간중계스포츠중계사이트제작스포츠중계스포츠중계스포츠중계마니라클락에이전시창원베트남노래방포항출장마사지포항출장마사지인계동 스웨디시인계동 스웨디시다산휴대폰성지이문동 휴대폰성지인계동 스웨디시인계동 스웨디시천안다국적노래방영덕대게 맛집급전급전대출서면노래방서면가라오케서면노래방강남하이퍼블릭강남하퍼스포츠중계제작스포츠중계api스포츠중계솔루션스포츠중계api스포츠중계 커뮤니티 제작스포츠중계api |